Small Molecule HPLC
Analysis of Small Molecules
저분자는 분자량이 작은 화합물을 의미합니다(일반적으로 900달톤 미만). 아미노산, 지질, 당, 지방산, 알칼로이드 등이 일반적인 저분자의 예시입니다.
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 액체 크로마토그래피(LC), 가스 크로마토그래피(GC), 박막 크로마토그래피(TLC) 및 모세관 전기영동법(CE) 등 저분자 분리에 여러 가지 방법을 사용할 수 있습니다. 또한 핵자기공명(NMR) 또는 질량 분석법(MS) 등이 이들을 식별하는 다른 방법입니다. 최근 몇 년간 질량 분석법이 합쳐진 액체 크로마토그래피(LC-MS)가 저분자 식별에 핵심 기술이 되었습니다.
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), UHPLC 또는 LC-MS로 저분자 분석에 대한 최상의 결과를 얻으려면 가장 적합한 고정상과 이동상 조건의 선택에 달려있습니다. 분석물의 화학적 성질이 가장 적합한 컬럼의 화학물질을 선택하는데 핵심입니다. 속도, 시료 매트릭스, 화합물 수와 같은 다른 측면이 고정상 선택에 가장 적합한 기본 물질을 정의합니다.
크로마토그램 찾기
관련 기술 문서
- Chromolith® HPLC and UHPLC columns are made from monolithic silica with a bimodal pore structure using sol-gel technology.
- Review the effects of efficiency (plate number), retention, and selectivity factors on HPLC resolution. See how factors relate to particle and column characteristics via the HPLC resolution equation.
- Supel™ Carbon LC U/HPLC columns packed with porous graphitic carbon (PGC) particles, used for the HPLC, UHPLC, UPLC, and LC-MS separation of polar or charged compounds at high temperatures (up to 250 ˚), pressures up to 700 bar, and the mobile phase pH range of 1-14.
- Various measures and options for maximized LC-MS sensitivity and low limit of detection (LOD) are shown on this page. Each and every tip avoids contaminations causing signal suppression, adduct formation, elevated background noise and increased spectrum complexity.
- This study demonstrates the impact of various mobile phase modifiers on the separation; formate modifiers outperform acetate in terms of MS signals (or sensitivity) and chromatographic resolution.
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관련 프로토콜
- HPLC separation of 17 important cannabinoids including CBD, delta 9 THC and THCA. Read the application note
- Complete workflow for the comprehensive analysis of terpenes in cannabis
- Amino Acid Analysis is the suitable tool for precise determination of protein quantities but also provides detailed information regarding the relative amino.
- Following GB method for Vitamin A and Vitamin E as it is written with a 250 x 4.6 mm Ascentis® Express C30 column gives baseline resolution between the critical pair (gamma-, and beta-tocopherol; peaks 3 and 4).
- Separation of Salicylic acid, meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, 99.5-100.5% (calc. to the dried substance); Acetylsalicylic acid, purum, ≥99.0% (HPLC)
- 모두 보기 (184)
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저분자 HPLC
저분자의 HPLC 분석은 주로 역상 분리 모드에서 수행됩니다. 극성 화합물을 분리하는 경우 친수성 상호작용 크로마토그래피(HILIC)와 순상(normal-phase) 크로마토그래피도 적합하며, HILIC가 선호되는 방법입니다. 이온 화합물을 분리하는 경우 이온 교환 분리 모드가 사용되고, 무기 음이온이나 양이온의 경우 이온 크로마토그래피도 사용될 수 있습니다.
HPLC 컬럼은 고정상으로 완전한 다공성 실리카 입자, 표면 다공성 실리카 입자, 중합체 입자 또는 단량체 실리카로 충전됩니다. 또한 산화 알루미늄, 지르코니아 입자, 탄소 입자가 사용됩니다. 저분자를 분리하기 위한 고정상 재료의 일반적인 공극 크기는 60 Å ~ 160 Å입니다. HPLC의 경우 고정상의 일반적인 입자 크기는 3 µm ~ 5 µm이며, UHPLC의 경우 더 작은 입자 크기인 2 µm 이하가 일반적으로 사용됩니다. 고정상에 다른 컬럼 선택도(변경)가 부착될 수 있습니다. C18 알킬 사슬은 역상(RP) 크로마토그래피에서 가장 일반적으로 사용되는 컬럼의 화학 물질입니다. 그럼에도 불구하고 C30, C8, 페닐, 펜타플루로페닐과 같은 기타 변경, 보다 광범위한 극성 변경, 이온 교환 또는 키랄 특성을 갖는 변경은 액체에 용해되는 거의 모든 화합물을 분리할 수 있습니다. RP-HPLC 이동상은 일반적으로 수용성 버퍼 또는 물과 아세토니트릴 또는 메탄올과 같은 수혼화성(water-miscible) 유기 용매로 구성됩니다.
HPLC 시료 전처리
식품, 음료, 화장품, 생물학적 시료, 매트릭스가 풍부한 제약품 제제(예: 크림, 시럽)와 같이 복잡하고 매트릭스가 풍부한 시료에서 원하지 않는 성분을 제거하고 관심 있는 분석물을 선택적으로 추출하기 위해 효율적인 시료 전처리 프로토콜이 필요합니다. 이는 2 µm 이하의 입자가 사용되는 UHPLC와 같이 입자 크기가 매우 작은 고정상인 경우 중요합니다. 일반적인 시료 전처리 방법은 액체-액체 추출, 고체상 추출(SPE)이며 생물학적 시료의 경우 여과 외에 단백질 침전도 있습니다. 표적 화합물의 선택적 용출 및 사전 농축 이외에도, 시료 전처리의 주요 목적은 시료 매트릭스에 의해 HPLC 고정상이 막히지 않도록 보호하는 것입니다. 단량체 실리카를 기반으로 하는 HPLC 컬럼은 매트리스를 높은 범위까지 허용할 수 있고, 미립자 컬럼보다 더 적은 시료 전처리가 필요합니다.
유도체화
일부 분자의 경우 HPLC 분리 이전(사전 컬럼) 또는 이후(사후 컬럼)에 유도체화가 필요합니다. 유도체화는 HPLC에서 더 나은 민감도 또는 크로마토그래피 보유를 위해 분자를 이들의 유도체로 변환시킵니다. 필요한 유도체화를 위해 적절한 물리적 및 화학적 특성을 지닌 화학 시약을 사용합니다.
하이라이트
분석법을 HPLC에서 UHPLC로 전환할 때 실행 시간 및 용매 소비의 절약을 계산합니다.
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