HPLC Buffers
완충액은 약산과 그 짝염기 또는 약 염기와 그 짝산의 용액입니다. 분석 화학에서, 완충액은 일반적으로 검체가 산 또는 염기 작용기를 함유하는 경우에 역상 고성능 크로마토그래피(RP-HPLC)에서 사용됩니다. 완충액은 수소/하이드로늄 및 수산화 이온의 영향을 완화하여 pH 변동을 감소시킵니다.
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이동상 버퍼
완충 종류, 이온 강도 및 pH를 고려하여 적절한 버퍼를 선택하는 것은 이온 분석물에 대한 RP-HPLC 분석법 개발에서 가장 중요한 단계입니다. RP-HPLC 내 이온 분석물질 보존성은 근본적으로 이동상의 pH에 의해 영향을 받습니다. 따라서, RP-HPLC 내 이동상의 pH 조절은 효과적인 분석물 분리에 대한 가장 중요한 파라미터입니다.
실리카 기반 컬럼에서 역상 분리를 위한 일반적인 pH 범위는 2에서 8 사이입니다. 버퍼는 pKa에서 pH를 가장 잘 제어하기 때문에 원하는 pH에 가까운 pKa를 반드시 가져야 합니다. 경험에 따르면, 원하는 이동상 pH의 pKa 값이 < 2 단위인 버퍼를 선택하는 것이 이상적입니다. 자사는 모든 고객의 실험실 크로마토그래피 요구사항을 위한 다양한 pH 범위의 HPLC 등급 버퍼를 제공합니다.
HPLC 버퍼 선택 시 고려해야 할 요소
화학적 순도
HPLC 실험에 활용되는 유기 용매와 함께 이동상 첨가제(버퍼, 염, 산 및 염기)의 품질은 검출기 감도 및 용출 프로토콜에 맞게 조정되어야 합니다. 최적의 크로마토그래피를 위해 고품질 용매 밎 시약을 권장합니다.
화학적 적합성
이동상 pH와 함께 버퍼 조성은 컬럼 하우징 재료 및 고정상 특성과 일치하도록 선택해야 합니다. 이는 컬럼 하드웨어 및 베드에 가해지는 손상을 방지합니다.
버퍼 용해도
이상적인 버퍼는 완전히 수용성이고 침전되지 않아야 합니다. 버퍼 농도를 신중하게 선택하여 버퍼가 유기 용매와 혼합되면서 더 높은 농도에서 침전되는 일이 없도록 해야 합니다. 이를 간과하는 경우, 펌프 작동에 문제가 발생하거나 HPLC 컬럼이 막힐 수 있습니다.
버퍼 강도
고정상과 약한 상호 작용을 보이는 용출액은 컬럼에서 약하게 결합된 분석물만 용출할 수 있는 반면에, 강한 상호 작용을 보이는 용출액은 강하게 결합된 샘플 분자를 용출합니다. 다양한 용매의 용출 또는 용매 강도는 사용되는 고정상 유형에 따라 다릅니다. 용출 강도 다음으로는, 완충액의 점도 및 UV 흡광도가 HPLC 분석에 사용하기 위한 적합성 측면에서 중요합니다.
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