SCR150

Saggio AldeRed per la rivelazione della ALDH

• Sinonimo/i: ALDH Assay, Aldehyde Dehydrogenase Assay, Cancer Stem Cell Assay
• Codice UNSPSC: 12352207
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.84

Proprietà

• tecniche: cell culture | stem cell: suitable; flow cytometry: suitable
• Livello qualitativo: 100
• Fluorescenza: λ_ex 488 nm; λ_ex 532 nm; λ_em 615 nm
• Metodo di rivelazione: fluorometric
• Condizioni di spedizione: wet ice

Descrizione

Descrizione generale

Il kit per il saggio AldeRed, per la rilevazione della ALDH, fornisce ai ricercatori che si occupano di cellule staminali e cancro nuove potenzialità per l'isolamento e la caratterizzazione di cellule vive Il reagente AldeRed è un substrato fluorescente spostato verso il rosso per l'aldeide deidrogenasi (ALDH) che consente di identificare e isolare le cellule mediante citometria a flusso anche nel caso di linee cellulari, anticorpi, animali transgenici e test reporter che emettono fluorescenza verde.

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Un'elevata attività della ALDH funge da marcatore universale per le cellule staminali, sia normali che tumorali. Le cellule possono essere identificate e isolate in base all'attività enzimatica dell'ALDH, un enzima detossificante responsabile dell'ossidazione dei sottoprodotti aldeidici nocivi. Il marcatore ALDH è stato utilizzato per isolare le cellule staminali del cancro da varie neoplasie umane tra cui vescica, seno, cervice, colon, testa e collo, fegato, polmone, pancreas, prostata e ovaio. Il saggio AldeRed utilizza il reagente AldeRed 588-A, un substrato della ALDH, fluorescente e non tossico, che è in grado di diffondere liberamente all′interno cellule integre e vitali, ma che rimane intrappolato nelle cellule una volta convertito nell'acido corrispondente dalla ALDH. La quantità di fluorescenza prodotta è proporzionale all'attività ALDH nelle cellule e viene misurata mediante citometria a flusso, consentendo anche l′isolamento delle cellule (sorting) mediante FACS. Il kit fornisce anche il reagente dietilaminobenzaldeide (DEAB), un inibitore della ALDH che viene utilizzato nel controllo negativo del test per consentire la valutazione della fluorescenza di fondo.

Applicazioni

• Per una eccitazione ed emissione ottimale di AldeRed 588-A, si consiglia di usare una combinazione di laser blu (488 nm) o laser verde (532 nm) con un rilevatore per PE-Texas Red (615 nm). E′ possibile anche il rilevamento in canali di misurazione prossimali al PE-Texas Red, come il canale PE; questo potrebbe però influenzare il delta MFI (intensità media di fluorescenza) tra il campione in analisi e il campione di controllo trattato con DEAB.
• Tutte le cellule vive e integre (anche quelle con bassa espressione di ALDH) diventano fluorescenti quando esposte ad AldeRed 588-A attivato. E′ necessario quindi usare un controllo trattato con DEAB per ogni campione in analisi, in modo da stabilire la fluorescenza di base.
• Maneggiare tutti i reagenti utilizzando tecniche asettiche.

Categoria di ricerca
Ricerca su cellule staminali

Apoptosi & Cancro

Componenti

1. AldeRed: (Cod. CS216596). Una provetta contenente 50 µg di AldeRed

2. Reagente DEAB: (Cod. CS216595). Una (1) provetta contenente 1 ml di reagente DEAB (dietilamminobenzaldeide).

3. Acido Cloridrico (2N): (Codice articolo. CS216594). Una (1) provetta contenente 1,5 ml di acido cloridrico 2 Normale.

4. Dimetilsolfossido: (Codice articolo. CS216593). Una (1) provetta contenente 1,5 ml di dimetilsolfossido (DMSO).

5. Tampone di reazione AldeRed: (Codice articolo. CS216592). Quattro (4) flaconi contenenti ciascuna 25 ml di tampone di reazione AldeRed.

6. Verapamil: Codice articolo. CS220012). Quattro (4) provette contenenti 615 µg di polvere di Verapamil ciascuna.

Qualità

• Ogni lotto viene testato misurando l'attività della ALDH tramite citometria a flusso nelle cellule SK-BR-3 .
• Il reagente AldeRed^® è puro al 95% (PMR).

Stoccaggio e stabilità

• Conservare il kit a 2-8°C.
• Il reagente AldeRed ricostituito e attivato può essere conservato in aliquote a -20°C al riparo dalla luce per 1 anno. Evitare di sottoporre a ripetuti cicli di congelamento e scongelamento.
• Il tampone per analisi AldeRed con verapamil può essere conservato a 2-8°C suddiviso in aliquote per 3 mesi.

Note legali

ALDERED is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS02,GHS06,GHS05,GHS09
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H225,H290,H301,H319,H411
• Consigli di prudenza: P210 - P233 - P234 - P273 - P301 + P310 - P305 + P351 + P338
• Classi di pericolo: Acute Tox. 3 Oral - Aquatic Chronic 2 - Eye Irrit. 2 - Flam. Liq. 2 - Met. Corr. 1
• Codice della classe di stoccaggio: 3 - Flammable liquids
• Punto d’infiammabilità (°F): 55.4 °F
• Punto d’infiammabilità (°C): 13 °C