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Purification de protéines biotinylées

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Résines et colonnes de purification haute performance streptavidine-Sepharose HiTrap™ de Cytiva.

Purification de protéines recombinantes par chromatographie d'affinité.

Billes magnétiques en tubes dans un rack pour la purification des protéines

Billes magnétiques PureProteome™ pour la purification des protéines

Les anticorps et les protéines biotinylés sont couramment utilisés dans la recherche fondamentale et la découverte de nouveaux médicaments. Il existe plusieurs résines de chromatographie d'affinité ainsi que diverses colonnes et plaques préremplies qui permettent de fixer, d'isoler et de purifier les anticorps et les protéines biotinylés.

Billes d'agarose et gels d'affinité
Billes magnétiques
Plaques haute capacité revêtues de streptavidine SigmaScreen™
Colonnes et supports de chromatographie Amersham™ de Cytiva

Billes d'agarose et gels d'affinité

Les billes d'agarose et les gels d'affinité permettent de purifier les anticorps et les protéines biotinylés grâce à de la streptavidine ou de l'avidine greffée sur l'agarose en billes. L'avidine et la streptavidine fixent toutes deux la biotine avec une grande affinité, bien que l'avidine puisse présenter une forte liaison non spécifique. L'Extravidin®-agarose utilise une avidine modifiée présentant une très forte affinité et une très grande spécificité pour la biotine. Adaptées à la purification à petite ou grande échelle, ces résines conviennent à la purification sur colonne gravitaire, à la centrifugation à faible vitesse en traitement discontinu ("batch processing") et à la chromatographie basse pression. Les gels d'affinité EZview™ intègrent un colorant rouge qui permet à l'utilisateur de différencier facilement le culot du surnageant, minimisant ainsi la perte de protéines lors d'une purification en mode "batch".

Billes magnétiques

Les billes magnétiques PureProteome™ revêtues de streptavidine constituent un moyen rapide et reproductible de purifier les immunoglobulines contenues dans des mélanges complexes tels que les échantillons de sérum, de plasma ou de surnageant de culture cellulaire. Les anticorps et les protéines biotinylés sont purifiés à l'aide d'une plateforme ou d'un rack magnétique afin de séparer les billes des fractions de lavage et d'élution. Cette méthode est adaptée aux techniques à bas débit utilisant des microtubes à centrifuger individuels ou aux techniques à plus haut débit utilisant des plaques à 96 puits avec ou sans automatisation. Les particules magnétiques revêtues de streptavidine peuvent également être utilisées pour la purification des anticorps et des protéines biotinylés.

Plaques haute capacité revêtues de streptavidine SigmaScreen™

Les plaques haute capacité revêtues de streptavidine SigmaScreen™ utilisent une technologie de revêtement exclusive qui améliore nettement la capacité de fixation de la biotine par rapport aux plaques recouvertes de streptavidine ou d'ExtrAvidine standards. Avec une capacité de fixation supérieure à 300 pmol/puits pour le format 96 puits ou à 150 pmol/puits pour le format 384 puits, ces plaques permettent d'éluer la protéine capturée en vue d'une analyse post-capture par différentes méthodes telles que la désorption/ionisation laser assistées par matrice (MALDI), la technologie ICAT ("Isotope-Coded Affinity Tagging") ou l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium (SDS-PAGE). Les plaques haute capacité revêtues de streptavidine SigmaScreen™ sont fabriquées selon la norme ISO 9002 sur notre site conforme aux bonnes pratiques de fabrication (BPF ou GMP pour "Good Manufacturing Practice") et offrent une grande homogénéité inter-puits et inter-plaque.

Colonnes et supports de chromatographie Amersham™ de Cytiva

Il existe diverses colonnes et résines de chromatographie Amersham™ de Cytiva qui permettent une purification fiable et à haute résolution, à petite ou grande échelle, des anticorps et des protéines biotinylés.

Les colonnes SpinTrap™ sont des colonnes de centrifugation à usage unique préremplies qui permettent une purification simple, à petite échelle, des anticorps et des protéines biotinylés.
Les colonnes HiTrap™ HP sont préremplies d'une résine streptavidine-Sepharose™ haute performance pour la purification préparative de routine des anticorps et des protéines biotinylés.
Les plaques de filtration MultiTrap™ à 96 puits permettent de disposer d'un format rapide et fiable pour la purification à petite échelle des anticorps et des protéines biotinylés sur des plaques de filtration à 96 puits préremplies, compatibles avec la centrifugation ou la filtration sous vide, manuellement ou à l'aide de systèmes robotisés automatiques.
Les supports de streptavidine-Mag Sepharose™ sont composés de billes magnétiques à base de Sepharose™ conçues pour simplifier l'enrichissement en protéines cibles par immunoprécipitation ou par "pull-down". Ils peuvent être utilisés pour la purification et le criblage rapides, à petite échelle, d'anticorps et de protéines biotinylés à partir de surnageants de cellules.
La résine streptavidine-Sepharose™ haute performance est aussi vendue séparément pour la transposition d'échelle des procédés de purification.

Ressources produits apparentées

Brochure : Refine Protein Preparation
Purification or Removal of Biotin and Biotinylated Substances

Applications apparentées

Purification des protéines

Techniques, réactifs et protocoles permettant de purifier les protéines recombinantes par différentes méthodes telles que la chromatographie d'échange d'ions, la chromatographie d'exclusion stérique ou la chromatographie d'affinité.

Expression des protéines

Technologies d'expression protéique permettant d'exprimer des protéines recombinantes dans des systèmes d'expression de type E. coli, cellules d'insectes, levures et cellules de mammifères pour la recherche fondamentale et pour faciliter la production de médicaments et de vaccins.

Lyse et extraction des protéines

Panorama des méthodes de lyse cellulaire et d'extraction protéique, comme la solubilisation par détergents, la lyse par congélation/décongélation, le choc osmotique, la sonication, la lyse cellulaire enzymatique et les techniques de fragmentation mécanique comme l'homogénéisation au Dounce, au Polytron ou au mortier et au pilon.

Technique de pull-down (interactions protéines/protéines)

Tests, réactifs et protocoles permettant d'étudier les interactions protéines/protéines in vitro par différentes méthodes : pull-down ou GST pull-down, purification par affinité en tandem (TAP pour "Tandem Affinity Purification") et co-immunoprécipitation.

Concentration des protéines et échange de tampon

Panorama des techniques utilisées pour concentrer et clarifier les échantillons de protéines pour les procédures de purification, de bioproduction et d'analyse. Inclut des protocoles et des vidéos sur les techniques de filtration et d'ultrafiltration, l'enrichissement en protéines ainsi que le dessalage et l'échange de tampon par dialyse, diafiltration et chromatographie.

Électrophorèse sur gel

L'électrophorèse sur gel permet de séparer les protéines en vue de leur purification, de leur caractérisation et de leur détection. Des méthodes comme l'électrophorèse PAGE en conditions natives, l'électrophorèse SDS-PAGE, l'électrophorèse 2D-PAGE et l'électrofocalisation permettent de préparer des applications en aval comme l'analyse par western blot, la spectrométrie de masse et l'analyse protéomique.

Analyses par western blot

Panorama des principes et applications de l'analyse par western blot pour la détection des protéines. Inclut des liens vers les protocoles détaillés, des vidéos et d'autres ressources sur l'extraction des protéines, l'électrophorèse sur gel, le transfert sur membranes en PVDF ou en nitrocellulose, et les méthodes de détection par chimioluminescence, par colorimétrie et par fluorescence.

Spectrométrie de masse

La spectrométrie de masse (MS) est un outil analytique permettant d'identifier des composés, de déterminer leur structure chimique et d'évaluer leur abondance isotopique. Dans cette technique, les échantillons sont ionisés, puis les ions obtenus sont identifiés d'après leur rapport masse/charge (m/z).

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