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Réactifs de dissociation cellulaire

Microscopie à fond clair de l'avancement d'un détachement cellulaire à l'aide de réactifs de dissociation

Pour reproduire leur environnement endogène, les phénotypes de cellules adhérentes (comme les cellules épithéliales) sont typiquement ensemencés sur des surfaces traitées pour la culture cellulaire, auxquelles ils se fixent afin de survivre et de proliférer. La propagation, la numération et l'analyse en aval nécessitent de dissocier les cellules adhérentes et les cellules issues de tissus solides pour créer des suspensions. Ces suspensions de cellules individuelles sont nécessaires pour le comptage des cellules, le ré-ensemencement en vue du repiquage, et les tests et analyses cellulaires.

Les réactifs de dissociation englobent des enzymes naturellement présentes, des alternatives non enzymatiques plus douces, ou peuvent fonctionner par chélation du calcium afin de bloquer l'adhérence des cadhérines, ce qui détache les cellules des surfaces et les unes des autres. Les réactifs de dissociation cellulaire peuvent être spécifiques à certains substrats de la matrice extracellulaire (MEC).

Notre collection complète de réactifs de dissociation cellulaire comprend :

La trypsine StableCell™, réactif de détachement cellulaire, conserve une activité stable à température ambiante

Trypsine, trypsine recombinante et trypsine StableCell™

La trypsine, protéase à sérine, est l'une des enzymes de détachement les plus couramment utilisées avec les lignées de cellules adhérentes et pour la dissociation des tissus. Il a été montré que les préparations de trypsine brutes sont typiquement plus efficaces dans les deux applications, mais une incubation des cellules avec une concentration de trypsine trop élevée ou pendant trop longtemps risque d'endommager les membranes cellulaires et de provoquer la mort des cellules. Les cellules cultivées sont donc plus fréquemment retirées du substrat de culture par un traitement associant de la trypsine et de l'EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique), avec une concentration en trypsine de 0,025 % à 0,5 %.

Les solutions de trypsine StableCell™ ont été mises au point de façon à avoir le même pouvoir de détachement cellulaire que les solutions de trypsine standard, mais sans avoir besoin de créer des aliquotes, de congeler puis de décongeler la trypsine. Cela permet de gagner un temps significatif pour le repiquage ou les expériences en se débarrassant de l'aliquotage et du temps de décongélation de la trypsine, et libère un espace précieux dans les congélateurs du laboratoire. Il est recommandé de conserver nos solutions de trypsine StableCell™ entre 2 et 8 °C, mais nos études indiquent que la trypsine StableCell™ conserve > 90 % de son activité et de ses performances lorsqu'elle est stockée à 37 °C.

Collagénase et dispase

La collagénase clive les liaisons peptidiques du collagène endogène à triple hélice. Du fait de sa capacité unique à hydrolyser le collagène endogène, elle est largement utilisée pour isoler les cellules de tissus animaux. Les collagénases sont présentes dans divers micro-organismes et dans un grand nombre de cellules animales différentes. La plus puissante est la collagénase "brute" sécrétée par la bactérie anaérobie Clostridium histolyticum.

Les dispases sont des protéases rapides, efficaces, douces et neutres, capables de séparer du substratum des feuillets épithéliaux intacts en culture. La dispase I est utilisée pour digérer les tissus pulmonaires, traiter les cellules en vue d'une coloration pour cytométrie en flux, et isoler les lymphocytes T CD4 murins.

Réactifs de dissociation pour cultures spécialisées

Pour dissocier ou détacher les types de cellule ou de tissu pouvant nécessiter une activité enzymatique plus douce, les solutions Accutase® et Accumax™ contiennent des enzymes efficaces à plus basse température. Ces solutions :

  • Détachent efficacement les cellules souches embryonnaires et neuronales
  • Assurent un détachement en douceur pour préserver la viabilité cellulaire et peuvent améliorer le rendement cellulaire
  • Ne nécessitent aucune neutralisation

Documentation produits apparentée

Brochure : Enzymes for Cell Dissociation and Lysis
Protocole : Cell Dissociation with Trypsin
Article technique : Tissue Dissociation Guide : Collagenase, Dispase, and Liberase Enzyme Types

Catégories de produits apparentées
Milieux et tampons classiques
Les formulations des milieux de culture cellulaire ont été optimisées durant des dizaines d'années de recherche pour répondre à diverses physiologies cellulaires. Vous trouverez ici des milieux du type DMEM, MEM, RPMI-1640, formulations F-10 et F-12 de Ham, ainsi que des solutions sans sérum telles que M199.
Facteurs d'adhérence
Les facteurs d'adhérence qui imitent la matrice extracellulaire (MEC) constituent pour les cellules en culture des éléments importants qui stimulent la croissance et le comportement physiologiques. Vous pouvez choisir parmi un large éventail de polymères biologiques et de synthèse pour améliorer vos conditions de culture cellulaire.
Lignées de cellules de mammifères
Les lignées cellulaires d'être humain et autres espèces de mammifères sont indispensables à la modélisation de maladies et de systèmes biologiques. Ce sont aussi des outils précieux pour la production de protéines, d'anticorps, de virus et de vaccins. Nous fournissons des lignées cellulaires authentifiées exemptes de contaminants, dont un grand nombre provient de l'ECACC.
Cellules souches
Notre gamme complète de produits qualifiés pour les cellules souches embryonnaires (CSE) et les cellules souches pluripotentes induites (CSPi), composée de lignées de cellules souches et de milieux de différenciation et de maturation, fournit aux chercheurs des solutions pratiques et rentables pour cultiver de manière fiable les cellules souches pluripotentes.
Cellules primaires
Les cellules primaires sont directement issues de tissus vivants et reproduisent fidèlement la physiologie des systèmes biologiques. Notre collection comprend du sang, des xénogreffes de tumeur de patient et des hépatocytes indispensables au criblage de médicaments et aux études ADME/tox.
Filtres sous vide Stericup®
Les filtres indispensables Stericup® et les filtres durables Stericup® E sont des dispositifs intégrés qui permettent de filtrer les milieux et ainsi de protéger les cultures cellulaires. Vous pouvez choisir parmi toute une gamme de membranes et de tailles de pores conçue pour garantir des débits rapides et une faible adsorption protéique, pour exclure les mycoplasmes et pour réduire les déchets plastiques.
Filtres stérilisants Millipore®
Vous pouvez préparer des milieux de culture cellulaire et stériliser par filtration des solutions aqueuses de quelques millilitres seulement jusqu'à 20 litres grâce aux unités de filtration stérilisante Millipore®, à la pointe du marché. Il vous suffit de choisir la membrane et la taille de pores adaptées à votre application parmi les unités Steriflip®, Sterivex®, Stericap® et Steripak®.
Dissociation de tissus
Retrouvez des protocoles et des ressources pour la dissociation des tissus et le détachement des cellules, ainsi qu'une offre complète d'enzymes fiables et très bien caractérisées, notamment la trypsine, la collagénase, la papaïne, les nucléases (DNase et RNase), l'hyaluronidase, l'élastase et la protéase XIV.
Applications apparentées
Culture de cellules de mammifères
Principes, méthodes et applications de la culture de cellules de mammifères in vitro, accompagnés de liens vers des articles, protocoles et vidéos pour une technique aseptique, de passage et de repiquage adéquate, et considérations sur les milieux de culture.
Culture de cellules souches
Aperçu des différents types de cellules souches, principes fondamentaux de la culture de cellules souches et applications des cellules souches en recherche fondamentale et dans les applications de recherche clinique, comme la régénération tissulaire, les maladies génétiques et le cancer.
Culture cellulaire 3D
Applications, principes et techniques de la culture cellulaire tridimensionnelle (3D). Cette section inclut des techniques et des descriptions de matrices correspondant à des méthodes avec et sans structure de support pour cultiver des modèles in vitro complexes, notamment des organoïdes et des sphéroïdes.
Culture de cellules primaires
Les cellules primaires isolées directement à partir de sources humaines et animales conservent la pertinence physiologique des tissus dont elles sont dérivées, et sont utilisées dans les tests ADME/Tox. Trouvez des applications et des méthodes pour la culture in vitro de cellules primaires de mammifères.
Préparation des milieux de culture cellulaire
La préparation des milieux de culture pour la culture cellulaire in vitro englobe la préparation des différentes formes de milieux, les méthodes de stérilisation, les suppléments de croissance et de régulation cellulaires, ainsi que le stockage et l'utilisation des milieux de culture.
Croissance cellulaire et maintenance des cellules
Synopsis des conditions, milieux, nutriments, environnements et du matériel de culture nécessaires à une propagation réussie des cellules de mammifères et de levures. Sont notamment présentés les réactifs de nutrition, les techniques stériles et la filtration, ainsi que les conditions requises pour les cultures 2D, 3D et en suspension.
Résolution des problèmes de culture cellulaire
Conseils d'expert permettant de corriger les problèmes courants en culture cellulaire, notamment concernant la contamination bactérienne et fongique, les débris dans les milieux de culture, le détachement ou l'agglutination des cellules, la croissance lente et la faible viabilité.
Analyse d'images et imagerie de cellules vivantes
Aperçu des outils et réactifs actuellement utilisés dans l'imagerie et l'analyse des cellules vivantes, avec des applications dans le trafic cellulaire, la santé des cellules, l'analyse de l'expression génique, la migration cellulaire, la culture de cellules en 3D, la dynamique cytosquelettique, etc.
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