Tampons de HPLC
Les tampons sont des solutions constituées d'un acide faible et de sa base conjuguée, ou d'une base faible et de son acide conjugué. En chimie analytique, les tampons sont généralement utilisés en chromatographie liquide haute performance en phase inverse (RP-HPLC), lorsque l'échantillon contient des groupements fonctionnels acides ou basiques. Les tampons atténuent l'influence des ions hydrogène/hydronium et des ions hydroxyde, ce qui réduit les fluctuations de pH.
Ressources produits apparentées
Brochure : LC-MS Resource Guide
Support : Calculateur pour le transfert de méthodes HPLC
Tampons pour phase mobile
L'étape la plus critique dans le développement d'une méthode de RP-HPLC pour des analytes ioniques est le choix d'un tampon adapté en termes de force ionique, de pH et d'espèces tampon. La rétention des analytes ioniques en RP-HPLC est essentiellement liée au pH de la phase mobile. C'est pourquoi la régulation du pH de la phase mobile en RP-HPLC est l'un des paramètres les plus importants pour une séparation efficace des analytes.
Les séparations en phase inverse réalisées sur des colonnes à base de silice ont généralement lieu entre pH 2 et pH 8. Le tampon doit avoir un pKa proche du pH souhaité, car les tampons contrôlent mieux le pH à proximité de leur pKa. En règle générale, l'idéal est de choisir un tampon dont le pKa est situé à moins de 2 unités du pH recherché pour la phase mobile. Nous proposons des tampons de qualité HPLC convenant à une large gamme de pH et répondant à tous vos besoins chromatographiques de laboratoire.
Facteurs à prendre en compte dans le choix d'un tampon en HPLC
Pureté chimique
La qualité des additifs ajoutés à la phase mobile (tampons, sels, acides et bases) et des solvants organiques utilisés dans une expérience de HPLC doit être adaptée à la sensibilité du détecteur et au protocole d'élution. Pour une chromatographie optimale, il est recommandé d'employer des solvants et des réactifs de grande qualité.
Compatibilité chimique
La composition du tampon et le pH de la phase mobile doit être choisie en fonction du matériau dans lequel la colonne est fabriquée et de la nature de la phase stationnaire. Cela permet de ne pas altérer le matériau constitutif et le lit de la colonne.
Solubilité du tampon
Dans l'idéal, le tampon doit être parfaitement hydrosoluble et ne doit pas précipiter. La concentration du tampon doit être choisie avec précaution afin d'éviter une précipitation aux fortes concentrations, lorsque le tampon est mélangé au solvant organique. Négliger cet aspect peut engendrer des problèmes opérationnels au niveau des pompes et provoquer un colmatage de la colonne de HPLC.
Force du tampon
Un éluant formant des interactions faibles avec la phase stationnaire ne peut éluer sur la colonne que les analytes faiblement liés, tandis qu'une interaction forte permet d'éluer les molécules de l'échantillon fortement liées. La force éluante des solvants dépend du type de phase stationnaire utilisé. En plus de la force éluante, la viscosité et l'absorbance dans l'UV du tampon sont des éléments essentiels pour savoir si le tampon convient à une analyse par HPLC.
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