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Merck

A novel coagulation inhibitor from Schistosoma japonicum.

Parasitology (2015-10-16)
Shiwanthi L Ranasinghe, Katja Fischer, Geoffrey N Gobert, Donald P McManus
RESUMEN

Little is known about the molecular mechanisms whereby the human blood fluke Schistosoma japonicum is able to survive in the host venous blood system. Protease inhibitors are likely released by the parasite enabling it to avoid attack by host proteolytic enzymes and coagulation factors. Interrogation of the S. japonicum genomic sequence identified a gene, SjKI-1, homologous to that encoding a single domain Kunitz protein (Sjp_0020270) which we expressed in recombinant form in Escherichia coli and purified. SjKI-1 is highly transcribed in adult worms and eggs but its expression was very low in cercariae and schistosomula. In situ immunolocalization with anti-SjKI-1 rabbit antibodies showed the protein was present in eggs trapped in the infected mouse intestinal wall. In functional assays, SjKI-1 inhibited trypsin in the picomolar range and chymotrypsin, neutrophil elastase, FXa and plasma kallikrein in the nanomolar range. Furthermore, SjKI-1, at a concentration of 7·5 µ m, prolonged 2-fold activated partial thromboplastin time of human blood coagulation. We also demonstrate that SjKI-1 has the ability to bind Ca(++). We present, therefore, characterization of the first Kunitz protein from S. japonicum which we show has an anti-coagulant properties. In addition, its inhibition of neutrophil elastase indicates SjKI-1 have an anti-inflammatory role. Having anti-thrombotic properties, SjKI-1 may point the way towards novel treatment for hemostatic disorders.

MATERIALES
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Descripción del producto

Sigma-Aldrich
Ácido clorhídrico, ACS reagent, 37%
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Sigma-Aldrich
Alcohol etílico puro, 200 proof, ACS reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
Ácido clorhídrico, ACS reagent, 37%
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Sigma-Aldrich
Cloruro de hidrógeno solution, 4.0 M in dioxane
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Sigma-Aldrich
Alcohol etílico puro, 200 proof, meets USP testing specifications
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Sigma-Aldrich
Alcohol etílico puro, for molecular biology
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Sigma-Aldrich
Ácido clorhídrico solution, 1.0 N, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Ácido clorhídrico, meets analytical specification of Ph. Eur., BP, NF, fuming, 36.5-38%
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Sigma-Aldrich
Ácido clorhídrico, 37 wt. % in H2O, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Ácido clorhídrico, 36.5-38.0%, BioReagent, for molecular biology
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Sigma-Aldrich
Cloruro de hidrógeno solution, 2.0 M in diethyl ether
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Sigma-Aldrich
Etanol, purum, absolute ethanol, denaturated with 4.8% isopropanol, A15 IPA1, ≥99.8% (based on denaturant-free substance)
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Supelco
Ácido clorhídrico solution, volumetric, 0.1 M HCl (0.1N), endotoxin free
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Sigma-Aldrich
Cloruro de hidrógeno solution, 1.0 M in diethyl ether
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Sigma-Aldrich
Ácido clorhídrico solution, ~6 M in H2O, for amino acid analysis
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Sigma-Aldrich
Cloruro de hidrógeno solution, 3 M in cyclopentyl methyl ether (CPME)
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Sigma-Aldrich
Etanol, purum, fine spirit, denaturated with 4.8% methanol, F25 METHYL1, ~96% (based on denaturant-free substance)
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Sigma-Aldrich
Ácido clorhídrico solution, 32 wt. % in H2O, FCC
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Supelco
Ethanol solution, certified reference material, 2000 μg/mL in methanol
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Sigma-Aldrich
Etanol, purum, absolute ethanol, denaturated with 2% 2-butanone, A15 MEK1, ≥99.8% (based on denaturant-free substance)
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Sigma-Aldrich
Cloruro de hidrógeno solution, 1.0 M in acetic acid
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Sigma-Aldrich
Etanol, purum, fine spirit, denaturated with 2% 2-butanone, F25 MEK1, ~96% (based on denaturant-free substance)
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Sigma-Aldrich
Quin-2, suitable for fluorescence, ≥95% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Etanol, purum, secunda spirit, denaturated with 2% 2-butanone, S15, ~96% (based on denaturant-free substance)
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