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Dynasore enhances the formation of mitochondrial antiviral signalling aggregates and endocytosis-independent NF-κB activation.

British journal of pharmacology (2015-04-09)
M Ailenberg, C Di Ciano-Oliveira, K Szaszi, Q Dan, M Rozycki, A Kapus, O D Rotstein
RESUMEN

Dynasore has been used extensively as an inhibitor of clathrin-mediated endocytosis. While studying the role of endocytosis in LPS-induced signalling events, we discovered that dynasore itself induced activation of NF-κB, independently of its effects on endocytosis and without involving the Toll-like receptor 4 signalling pathways. The purpose of this study was to characterize this novel effect and to explore the underlying mechanism of action. We utilized gel electrophoresis, microscopy, gene knockdown and luciferase-based promoter activity to evaluate the effect of dynasore on cell signalling pathways and to delineate the mechanisms involved in its effects, Dynasore activated the NF-κB and IFN-β pathways by activating mitochondrial antiviral signalling protein (MAVS). We showed that MAVS is activated by NOX/Rac and forms high molecular weight aggregates, similar to that observed in response to viral infection. We also demonstrated that dynasore-induced activation of JNK occurs downstream of MAVS and is required for activation of NF-κB and IFN-β. These findings demonstrate a novel effect of dynasore on cell signalling. We describe a novel Rac1-, ROS- and MAVS-mediated signalling cascade through which dynasore dramatically activates NF-κB, mimicking the viral induction of this key inflammatory signalling pathway. Our results call attention to the need for a broader interpretation of results when dynasore is used in its traditional fashion as an inhibitor of clathrin-mediated endocytosis. These results suggest the intriguing possibility that dynasore or one of its analogues might be of value as an antiviral therapeutic strategy or vaccine adjuvant.

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Sigma-Aldrich
Peróxido de hidrógeno solution, 30 % (w/w) in H2O, contains stabilizer
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Dodecilsulfatosódico, BioReagent, suitable for electrophoresis, for molecular biology, ≥98.5% (GC)
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Dodecilsulfatosódico, ≥99.0% (GC), dust-free pellets
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Sodium dodecyl sulfate solution, BioUltra, for molecular biology, 10% in H2O
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Timidina, powder, BioReagent, suitable for cell culture
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Sodium dodecyl sulfate solution, BioUltra, for molecular biology, 20% in H2O
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Dodecilsulfatosódico, BioUltra, for molecular biology, ≥99.0% (GC)
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Timidina, ≥99%
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Anti-β-actina monoclonal antibody produced in mouse, clone AC-74, ascites fluid
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Supelco
Dodecilsulfatosódico, dust-free pellets, suitable for electrophoresis, for molecular biology, ≥99.0% (GC)
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Dodecilsulfatosódico, ≥98.0% (GC)
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Dodecilsulfatosódico, ACS reagent, ≥99.0%
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Dodecilsulfatosódico, ReagentPlus®, ≥98.5% (GC)
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Dodecilsulfatosódico, tested according to NF, mixture of sodium alkyl sulfates consisting mainly of sodium dodecyl sulfate
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Timidina, ≥99.0% (HPLC)
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Peróxido de hidrógeno solution, 34.5-36.5%
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Dodecilsulfatosódico, BioXtra, ≥99.0% (GC)
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Dodecilsulfatosódico, 92.5-100.5% based on total alkyl sulfate content basis
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Dodecilsulfatosódico, ≥90% ((Assay))
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