HPLC Analysis of Piroxicam and 2-Aminopyridine in Urine on Discovery® HS F5 after SPE using Discovery® DSC-MCAX
CONDITIONS
sample preparation
SPE (Solid Phase Extraction)
sample/matrix
human urine spiked with piroxicam (4 μg/mL) and 2-aminopyridine (10 μg/mL)
SPE tube/cartridge
Discovery DSC-MCAX, 100 mg/3 mL (52783-U)
condition
1 mL methanol; 1 mL 10 mM potassium phosphate, pH 3
sample addition
1 mL
washing
1 mL 10 mM potassium phosphate, pH 3; 1 mL methanol
elution
1 mL 5% ammonium hydroxide in methanol
eluate post-treatment
evaporate to dryness with nitrogen at room temperature, reconstitute in 1 mL mobile phase
column
Discovery HS F5, 15 cm x 4.6 mm I.D., 5 μm particles (567516-U)
mobile phase
[A] 10 mM potassium phosphate, pH 6: [B] acetonitrile (85:15, A:B)
flow rate
2 mL/min
column temp.
25 °C
detector
UV, 220 nm
injection
10 μL
Beschreibung
Anwendung
Vorbehandlung der Probe:
Piroxicam und 2-Aminopyridin (der polare Metabolit des Piroxicam) wurde bis zum Gehalt von 4 bzw. 10 μg/mL zu Urinproben (Mensch) gegeben. Die Urinprobe wurde 1:1 mit 10 mM Kaliumphosphatlösung, pH 3, verdünnt.
Konditionieren der SPE-Kartusche mit 1 mL Methanol und 1 mL 10 mM Kaliumphosphatlösung, pH 3
Aufgabe von 1 mL der verdünnten versetzten Urinprobe
Waschen mit 1 mL 10 mM Kaliumphosphatlösung, pH 3, und 1 mL Methanol
Eluieren mit 1 mL 5% Ammoniumhydroxid in Methanol
Eindampfen bis zur Trockne mit N2 bei Raumtemperatur
Aufnehmen in 1 mL der mobilen Phase
Wiederholen der obigen Methode mit zwei Misch-Modus-Kationentauscher-Phasen mit äquivalentem Bettgewicht/Hardware der Konkurrenz
Rechtliche Hinweise
Discovery is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany