HPLC Analysis of Furosemide (Lasix) in Horse Serum on Discovery® C18 after SPE using Discovery® DSC-18
CONDITIONS
sample preparation
SPE (Solid Phase Extraction)
sample/matrix
acidified horse serum spiked with indapamide at 10 mg/mL
SPE tube/cartridge
Discovery DSC-18, 50 mg/1 mL (52601-U)
condition
1 mL methanol; 1 mL 10 mM potassium phosphate, pH 3
sample addition
1 mL
washing
10 mM potassium phosphate, pH 3
elution
1 mL 60% methanol in DI water.
column
Discovery C18, 15 cm x 4.6 mm I.D., 5 μm particles (504955)
mobile phase
[A] 10 mM KH2PO4, pH 3 (adjusted with H3PO4): [B] acetonitrile; (60:40, A:B)
flow rate
1 mL/min
column temp.
35 °C
detector
UV, 234 nm
injection
10 μL
Beschreibung
Anwendung
Vorbehandlung der Probe:
Reines Serum (Pferd) wurde mit 10μL 6M HCl/mL Serum angesäuert. Die IS-Blindlösung wurde aus angesäuertem Serum (Pferd) hergestellt, das mit Indapamid auf 10 μg/mL versetzt wurde.
Probe A = 10 μg/mL Furosemid in IS-Blindlösung
Probe B = 5 μg/mL Furosemid in IS-Blindlösung
Probe C = 0,5 μg/mL Furosemid in IS-Blindlösung
Probe D = 0,1 μg/mL Furosemid in IS-Blindlösung
Probe E = 0,05 μg/mL Furosemid in IS-Blindlösung
Konditionieren der SPE-Kartusche mit 1 mL Methanol und 1 mL 10 mM KH2PO4, pH 3 (eingestellt mit H3PO4)
Aufgabe von 1 mL der Probe
Waschen mit 10 mM KH2PO4, pH 3 (eingestellt mit H3PO4)
Elution mit 1 mL 60% Methanol
Rechtliche Hinweise
Discovery is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany