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Peroxidase-Markierungs-Kit

sufficient for 5 labeling reactions, kit of 1 (7 components), suitable for ELISA, suitable for immunohistochemistry

• Synonym(e): Peroxidase
• UNSPSC-Code: 12352204

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 5 labeling reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Spezifische Aktivität: 800 U/mg (800 U/mg protein at +25°C and pH 5.0 with ABTS and H2O2 as substrates.); 800 units/mg protein (At 25 °C and pH 5.0 with ABTS and H₂O₂ as substrates.)
• Verpackung: kit of 1 (7 components)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): ELISA: suitable; immunoblotting: suitable; immunohistochemistry: suitable
• Lagertemp.: 2-8°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Das Peroxidase-Markierungskit ist für die Markierung der primären Aminogruppen von Biomolekülen mit aktivierter Peroxidase (POD) aus Meerrettich zuständig.

Spezifität

Reinheit: (A405nm/A275nm): 3,0–3,5.
Isoenzymverteilung: > 90 % homogenes Isoenzym C.
Testzeit: Das Verfahren wurde für eine Reaktionstemperatur von +25 °C entwickelt. Bei +25 °C sollte die Reaktionszeit 2 Stunden betragen; sie kann aber auf 3 Stunden verlängert werden, ohne dass dies die Ergebnisse beeinflusst. Alternativ kann die Reaktion bei +2 bis +8 °C mit einer Reaktionszeit von 18 bis max. 24 Stunden durchgeführt werden.

Anwendung

Das Peroxidase-Markierungskit ist für die Markierung von wasserlöslichen Biomolekülen mit reaktiven und zugänglichen primären Aminogruppen (z. B. Peptiden oder Proteinen) mit Peroxidase zur Verwendung in analytischen Verfahren bestimmt. Es eignet sich besonders für die Kopplung von Antikörpern mit Peroxidase, da sich das resultierende Konjugat optimal für den Einsatz in immunchemischen Nachweissystemen eignet, z. B in:

• ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
• Immunhistochemie
• Immunblotting

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Schnell – Das gesamte Markierungsverfahren kann an einem Tag durchgeführt werden
• Einfach – nur 5 einfache Arbeitsschritte
• Vollständig – Alle notwendigen Puffer und Reagenzien sind im Kit enthalten

Verpackung

1 Kit mit 7 Komponenten.

• Peroxidase (aktiviert)
• Natriumkarbonat-/Hydrogenkarbonat-Puffer
• Natriumborhydrid (Tabletten)
• Triethanolamin-Puffer
• Glycin-Lösung
• Dialysepuffer
• Stabilisierungsmittel (einschließlich BSA und Kathon CG)

Angaben zur Herstellung

Arbeitslösung: Zubereitung von Arbeitslösungen

Zum Erhalt optimaler Ergebnisse jede Lösung mit der entsprechenden Nummer markieren. Die angegebenen Volumina reichen zur Markierung eines Anteils von 1,2 mg IgG aus.

Lösung 1: Peroxidase (aktiviert)
Das Lyophilisat von Flasche 1 in 0,5 mL bidestilliertem Wasser (Peroxidase-Konzentration = 16 mg/mL) rekonstituieren.

Lösung 2: Natriumkarbonat-/Hydrogenkarbonat-Puffer (100 mM, pH 9,8)
Flasche 2 auf 15 bis 25 °C äquilibrieren. Darauf achten, dass alle Pufferkomponenten aufgelöst sind. 90 mL bidestilliertem Wasser 10 mL aus Flasche 2 hinzufügen; gut mischen.

Lösung 3: Natriumborhydrid-Lösung (200 mM)
Beim Arbeiten mit Natriumborhydrid sollten Handschuhe getragen werden. Die Lösung unmittelbar vor ihrer Verwendung frisch zubereiten und auf Eis kühlen. 130 mL kaltem, bidestilliertem Wasser 1 Tablette aus Flasche 3 hinzufügen; gut mischen.

Lösung 4: Triethanolamin-Puffer (2 M, pH 8,0)
Flasche 4, gebrauchsfertig. Die Flasche auf 15 bis 25 °C äquilibrieren. Darauf achten, dass alle Pufferkomponenten aufgelöst sind.

Lösung 5: Glycin-Lösung (1 M, pH 7,0)
Das Lyophilisat aus Flasche 5 in 0,5 mL bidestilliertem Wasser (Glycin-Konzentration = 1 M) rekonstituieren.

Lösung 6: Dialysepuffer (1-fache Konz.)
Flasche 6 auf 15 bis 25 °C äquilibrieren. Darauf achten, dass alle Pufferkomponenten aufgelöst sind. 570 mL bidestilliertem Wasser 30 mL aus Flasche 6 hinzufügen; gut mischen.

Lösung 7: Stabilisierungsmittel
Flasche 7 ist gebrauchsfertig. Die Flasche auf 15 bis 25 °C äquilibrieren.

Herstellung der Immunglobulinlösung
Die IgG-Konzentration der Antikörperlösung sollte ca. 4 mg/mL (3,8 bis 4,2 mg/mL) betragen. Diese Konzentration ist für die Kopplung äußerst wichtig und sollte daher vor jeder Kopplung fotometrisch geprüft und ggf. angepasst werden: 1 mg/mL = 1,40 bei A_{280 nm} und 1 cm Pfadlänge. Für jede Markierungsreaktion werden 0,3 mL dieser Lösung benötigt.
Hinweis: Keine Konservierungsstoffe, z. B. Natriumazid, und Stabilisatoren, z. B. Albumin oder Detergenzien, verwenden.

Lyophilisiertes Immunglobulin, salzfrei
1,6 mg in einem geeigneten Behälter abwiegen und in 0,4 mL der Lösung 2 auflösen. Konzentration und pH-Wert überprüfen und ggf. korrigieren.

Immunglobulin in Puffer:

• Wenn Immunglobulin ohne zusätzliche Proteine oder Konservierungsstoffe in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) aufgelöst wird: Den pH-Wert mit 1 M Natriumkarbonatpuffer (Flasche 2) auf 9,8 korrigieren. Gegebenenfalls mit Lösung 2 verdünnen, um eine IgG-Konzentration von 4 mg/mL zu erhalten.
• Wenn das Immunglobulin in einem Puffer mit organischen Salzen aufgelöst wird: Immunglobulin mit Lösung 2 dialysieren und die Konzentration mit Lösung 2 auf 4 mg/mL abgleichen.

Stabilität der IgG-Lösung
Diese Lösungen sollten immer sofort einsatzbereit sein.
Lagerungsbedingungen (Arbeitslösung): Stabilität der Lösungen

• Lösung ist bei 2 bis 8 °C 3 Monate lang stabil. Die Lösung kann aliquotiert und bei -60° C oder darunter schockgefroren und dann bei -15 bis -25° C gelagert werden. Hinweis: Es kann ein Aktivitätsverlust von 10 bis 20 % beobachtet werden.
• Wenn die Lösungen 2, 5 und 6 in Aliquoten eingefroren gelagert werden, sind sie bei 2 bis 8 °C eine Woche und bei -15 bis -25 °C 6 Monate lang stabil.
• Die Lösung 3 sollte immer erst unmittelbar vor der Verwendung zubereitet werden.
• Die Lösungen 4 und 7 sind bei 2 bis 8 °C bis zu dem auf dem Kit angegebenen Verfallsdatum stabil.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Nur Kit-Komponenten

• Peroxidase (activated)
• Sodium Carbonate/Hydrogen Carbonate Buffer
• Sodium Borohydride (tablets)
• Triethanolamine Buffer
• Glycine Solution
• Dialysis Buffer
• Stabilizing Agent (includes BSA and Kathon CG)

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS02,GHS05,GHS06,GHS08
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H260,H301,H314,H317,H334,H360FD
• P-Sätze: P201 - P231 + P232 - P260 - P280 - P301 + P310 + P330 - P302 + P335 + P334 - P303 + P361 + P353 - P304 + P340 + P310 - P305 + P351 + P338 + P310 - P308 + P313 - P342 + P311 - P370 + P378
• Gefahreneinstufungen: Acute Tox. 3 - Eye Dam. 1 - Repr. 1B - Resp. Sens. 1 - Skin Corr. 1C - Skin Sens. 1 - Water-react 1 Oral
• Zusätzliche Gefahrenhinweise: EUH014
• Lagerklassenschlüssel: 4.3 - Hazardous materials which set free flammable gases upon contact with water
• WGK: WGK 2
• Flammpunkt (°F): does not flashNot applicable
• Flammpunkt (°C): does not flashNot applicable