Purification d'anticorps à l'aide de protéines
Les anticorps monoclonaux et polyclonaux sont couramment utilisés dans la recherche fondamentale et la découverte de nouveaux médicaments. Les biothérapies faisant appel à des anticorps représentent également une proportion croissante des nouveaux traitements. La chromatographie d'affinité réalisée sur des supports couplés à de la protéine A, de la protéine G et de la protéine L joue un rôle crucial dans les procédures d'isolement et de production d'anticorps purifiés, à l'échelle du laboratoire, à l'échelle de production et à l'échelle industrielle.
Billes d'agarose et gels d'affinité
Les billes d'agarose et les gels d'affinité permettent de purifier les anticorps grâce à de la protéine A ou de la protéine G greffée sur l'agarose en billes. Adaptées à la purification à petite ou grande échelle, ces résines conviennent à la purification sur colonne gravitaire, à la centrifugation à faible vitesse en traitement discontinu ("batch processing") et à la chromatographie basse pression. Les gels d'affinité EZview™ intègrent un colorant rouge qui permet à l'utilisateur de différencier facilement le culot du surnageant, minimisant ainsi la perte de protéines lors d'une purification en mode "batch". Les kits d'immunoprécipitation comprennent des gels d'affinité, des mini-colonnes de centrifugation et un réactif de lyse. Ils sont spécialement conçus pour une récupération maximale des protéines contenues dans les immunoprécipités.
Résines Sepharose™ et agarose à haut débit
La Sepharose™ à haut débit et l'agarose à haut débit utilisent des gels ou des billes d'agarose hautement greffées capables de supporter des pressions plus élevées que les billes d'agarose classiques. Ces résines sont donc adaptées aux méthodes de purification par chromatographie liquide rapide des protéines (FPLC pour "Fast Protein Liquid Chromatography"). Ces résines sont recommandées pour la purification d'anticorps à moyenne et grande échelles.
Système de billes magnétiques PureProteome™
Les billes magnétiques PureProteome™ revêtues de protéine A, de protéine G et de protéines A/G constituent un moyen rapide et reproductible de purifier les immunoglobulines contenues dans des mélanges complexes tels que les échantillons de sérum, de plasma ou de surnageant de culture. Les anticorps sont purifiés à l'aide d'une plateforme ou d'un rack magnétique afin de séparer les billes des fractions de lavage et d'élution. Cette méthode est adaptée aux techniques à bas débit utilisant des microtubes à centrifuger individuels ou aux techniques à haut débit automatisées.
Colonnes et supports de chromatographie Amersham™ de Cytiva
Il existe un large choix de supports de chromatographie Amersham™ de Cytiva pour la purification d'anticorps monoclonaux et polyclonaux provenant de différentes sources.
- Les colonnes GraviTrap™ sont des colonnes gravitaires préremplies conçues pour la purification manuelle rapide et efficace des anticorps monoclonaux et polyclonaux, des fragments d'anticorps issus de surnageants de culture cellulaire et des fluides biologiques.
- Les colonnes SpinTrap™ sont des colonnes de centrifugation à usage unique préremplies qui permettent une purification simple et à petite échelle des anticorps ou un enrichissement en protéines spécifiques.
- Les colonnes HiTrap™ HP sont préremplies de résine protéine A ou protéine G-Sepharose™ haute performance pour la purification préparative de routine des anticorps monoclonaux et polyclonaux tels que les immunoglobulines G humaines. Les colonnes HiTrap™ MabSelect sont préchargées de résine MabSelect™, support utilisé en bioproduction pour la capture d'anticorps monoclonaux à partir de grands volumes d'échantillons.
- Les plaques de filtration MultiTrap™ à 96 puits permettent de disposer d'un format rapide et fiable pour la purification à petite échelle des anticorps ou l'enrichissement en protéines d'intérêt sur des plaques de filtration à 96 puits préremplies, compatibles avec la centrifugation ou la filtration sous vide, manuellement ou à l'aide de systèmes robotisés automatiques.
- Les colonnes HiScreen™ Capto L sont préremplies de Capto L, résine de chromatographie d'affinité utilisée en bioproduction pour la capture d'anticorps et de fragments d'anticorps tels que les fragments Fab, les fragments variables à chaîne unique (scFv pour "single-chain variable Fragment") et les fragments d'anticorps à domaine unique (sdAb pour "single-domain Antibody"). Les colonnes HiScreen™ Capto L font partie de la plateforme de mise au point de procédés. Elles constituent un excellent choix pour l'optimisation des procédés et la sélection des paramètres.
- Les colonnes HiScreen™ MabSelect™ sont préremplies de résine MabSelect™ et font partie de la plateforme de mise au point de procédés proposée par Cytiva. La résine MabSelect™ est une résine utilisée en bioproduction pour la capture d'anticorps monoclonaux à partir de grands volumes d'échantillons. Ces colonnes constituent un excellent choix pour l'optimisation des procédés et la sélection des paramètres pour la capture d'anticorps monoclonaux.
- Les supports protéine A et protéine G-Mag Sepharose™ sont composés de billes magnétiques à base de Sepharose™ conçues pour simplifier l'enrichissement en protéines cibles par immunoprécipitation ou par "pull-down". Ils peuvent être utilisés pour la purification et le criblage rapides, à petite échelle, d'anticorps monoclonaux et polyclonaux à partir de sérum et de surnageants de cellules.
- Les produits GammaBind Sepharose™ et GammaBind Plus Sepharose™ sont des résines de chromatographie d'affinité couplées à de la protéine G qui permettent de purifier les immunoglobulines (IgG) de diverses espèces. Ils sont utilisés pour analyser et purifier les classes, sous-classes et fragments d'immunoglobulines contenus dans tous types de fluides biologiques ou de milieux de culture cellulaire. Ces résines conviennent parfaitement aux techniques d'immunoprécipitation.
- Les résines protéine A et protéine G-Sepharose™, Sepharose™ à haut débit, Capto L et MabSelect™ sont aussi vendues séparément pour la transposition d'échelle des procédés de purification.
Tableau : Affinité des immunoglobulines pour la protéine A, la protéine G et la protéine L |
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