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Merck

17-441

Sigma-Aldrich

Rac1/Cdc42-Aktivierungsassay-Kit

The Rac1/Cdc42 Activation Assay provides an effective method for detecting Rac & Cdc42 activity in cell lysates.

Synonym(e):

Rac1 activation assay

Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise


About This Item

UNSPSC-Code:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.84

Qualitätsniveau

Speziesreaktivität

human, mouse, rat

Hersteller/Markenname

Upstate®

Methode(n)

activity assay: suitable
affinity binding assay: suitable (G-protein)

NCBI-Hinterlegungsnummer

UniProt-Hinterlegungsnummer

Versandbedingung

wet ice

Angaben zum Gen

human ... RAC1(5879)

Allgemeine Beschreibung

Der Rac1/Cdc42-Aktivierungsassay (Katalognr. 17-441) stellt ein wirksames Verfahren für den Nachweis der Rac- und Cdc42-Aktivität in Zelllysaten dar. Dieser Assay nutzt den Downstream-Effektor von Rac/Cdc42, p21-aktivierte Proteinkinase (PAK1), um die aktive GTP-gebundene Form von Rac/Cdc42 aus der Probe zu isolieren. Die p21-Bindungsdomäne (PBD) von PAK1 wird als GST-Fusionsprotein exprimiert und ist an Agarose-Beads gekoppelt. Nach der Präzipitation wird ein Immunblot durchgeführt und das aktivierte Rac/Cdc42 wird mit spezifischen monoklonalen Antikörpern, gefolgt von einem an HRP konjugierten Sekundärantikörper und ECL-Reagens nachgewiesen.

Spezifität

Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch und Maus. Eine Kreuzreaktion mit allen Säugetierspezies wird erwartet.
Anti-Rac1, Klon 23A8: Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch, Maus und Ratte. Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht bekannt.
Anti-Cdc42Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch, Maus, Ratte und Hund. Eine Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht bekannt.

Komponenten

Rac/Cdc42-Assay-Reagens (PAK-1-PBD-Agarose), Katalognr. 14-325: Ein Fläschchen mit 300 μg an 150 μl Glutathion-Agarose-Beads gebundenes PAK-1 PBD, das als 50%ige Aufschlämmung in 20 mmol/l PBS, pH-Wert 7,4, mit 50 % Glycerin für ein Endvolumen von 300 μl bereitgestellt wird.

Anti-Rac1, Klon 23A8, Katalognr. 05-389: Ein Fläschchen mit 250 μg mit Protein G aufgereinigtem Maus-IgG2b in 250 μl Lagerpuffer (0,1 mol/l Tris-Glycin, pH-Wert 7,4, 0,15 mol/l NaCl mit 0,05 % Natriumazid)

Anti-Cdc42 (monoklonales Maus-IgG1), Katalognr. 05-542: Ein Fläschchen mit 50 μg aufgereinigtem Maus-IgG1 in 200 μl 50 % Lagerpuffer (20 mmol/l Natriumphosphat, pH-Wert 7,5, 150 mmol/l NaCl, 1,5 mmol/l Natriumazid mit 1 mg/ml BSA) und 50 % Glycerin.

Mg2+-Lyse-/Waschpuffer, 5X, Katalognr. 20-168: Zwei Fläschchen mit je 18 ml 5X-MLB: 125 mmol/l HEPES, pH-Wert 7,5, 750 mmol/l NaCl, 5 % Igepal Ca-630, 50 mmol/l MgCl2, 5 mmol/l EDTA und 10 % Glycerin.

100X GTPγS, 10 mmol/l, Katalognr. 20-176: Ein Fläschchen mit 50 μl 10-mmol/l-GTPγS, 100X-Stammlösung in 50 mmol/l Tris-HCl, pH-Wert 7,8, nicht hydrolysierbares Analogon von GTP. Ausreichend zum Markieren von 5 ml Zelllysaten.

100X GDP, 100 mmol/l, Katalognr. 20-177: Ein Fläschchen mit 50 μl 100-mmol/l-GDP, 100X-Stammlösung in 50 mmol/l Tris-HCl, pH-Wert 7,8. GDP (Guanosin-5′-Diphosphat) für die In-vitro-Markierung von G-Proteinen in der inaktiven Form. Ausreichend zum Markieren von 5 ml Zelllysaten.

Qualität

Regelmäßig mittels Präzipitation von Rac1-GTP und Cdc42-GTP aus 3T3/A31- und HeLa-Zelllysaten, die mit GTPγS beladen wurden (Lysate wurden für Cdc42-GTP in vitro mit GTPγS beladen), beurteilt. Das ausgefällte Rac1-GTP und Cdc42-GTP wurde mittels Immunblot-Analyse unter Verwendung von Anti-Rac1 (1 μg/ml) nachgewiesen.

Lagerung und Haltbarkeit

Bei -20 °C ab Versanddatum 1 Jahr haltbar

Rechtliche Hinweise

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Piktogramme

CorrosionEnvironment

Signalwort

Danger

H-Sätze

Gefahreneinstufungen

Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - Eye Dam. 1

Lagerklassenschlüssel

10 - Combustible liquids


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