Medienherstellung
Die Herstellung von Zellkulturmedien hat einen bedeutenden Einfluss auf das Säugerzellwachstum und die Versuchsergebnisse. Ebenso sind spezifische Medien erhältlich, die zur Unterstützung der Kultivierung von Mikroorganismen in vitro formuliert wurden. Nährmedien stellen eine Energiequelle für das Zellwachstum und Verbindungen bereit, die zelluläre Prozesse regulieren. Sowohl prokaryotische als auch eukaryotische Kulturen können spezifische Wachstumsanforderungen haben. Die Medienauswahl hängt vom Kulturtyp, vom Zweck der Kultivierung und von den Zelldichteanforderungen ab.
Zugehörige technische Artikel
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Zugehörige Protokolle
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Medienherstellung
Kommerzielle Nährmedien werden in Trocken- oder Pulverform, als Flüssigkonzentrat oder Arbeitslösung angeboten. Trockenmedien für Bouillonkulturen müssen durch Auflösen in destilliertem Wasser und Einstellung des pH-Werts vor der Sterilisation vorbereitet werden. Pulvermedien für Agarkulturen müssen in destilliertem Wasser gelöst, gerührt und danach gekocht oder autoklaviert werden, bevor sie unter Einhaltung aseptischer Arbeitsweise in sterile Petrischalen gegossen werden. Nährmedien, die als Flüssigkonzentrat angeboten werden, müssen aseptisch mit destilliertem Wasser verdünnt, auf den gewünschten pH-Wert eingestellt und in sterile Behälter zur Aufbewahrung abgefüllt werden. Nährmedien, die als Arbeitslösungen angeboten werden, sind nach der Zugabe des erforderlichen Serums oder Supplements bei Sterilfiltration und/oder aspetischen Bedingungen und Erwärmung auf die für das Zellwachstum geeignete Temperatur gebrauchsfertig.
Sterilisation von Nährmedien
Nährmedien, die aus Pulvern hergestellt werden, müssen vor der Verwendung durch Filtration, Erhitzen oder Autoklavieren sterilisiert werden. Obgleich Flüssigmedien oftmals steril und in einer gebrauchsfertigen Konzentration geliefert werden, wird eine Sterilfiltration empfohlen, insbesondere wenn Seren oder andere Supplemente vor der Anwendung zugegeben werden. Nach der Sterilisation muss bei der Handhabung von Nährmedien aseptische Arbeitsweise eingehalten werden, um eine Kreuzkontamination oder das Wachstum unerwünschter Mikroorganismen zu verhindern.
Supplemente für Nährmedien
Einige Supplemente, die zur Zellkultivierung oder -regulierung benötigt werden, sind instabil oder hitzelabil. Sie müssen daher vom Anwender vor der Verwendung zum hitzesterilisierten Basismedium zugegeben werden. Serum, das typischerweise vom Rind stammt (FBS), ist ein gebräuchliches Supplement, das in Tierzellkulturmedien eingesetzt wird. Hormone, Wachstumsfaktoren und spezifische Signalmoleküle können für das Wachstum bestimmter Zelltypen erforderlich sein. Additive wie IPTG werden zur Auslösung der Proteinexpression eingesetzt. Antibiotika werden möglicherweise zum Nährmedium gegeben, um das Wachstum kontaminierender Bakterien und Schimmelpilze zu unterdrücken. Kontaminationen können jedoch durch korrekte Handhabung und Lagerung der Medien gut kontrolliert werden.
Lagerung und Verwendung von Nährmedien
Kommerzielle und zubereitete Nährmedien in flüssiger Form, gegossener Agarform oder Arbeitslösungen werden typischerweise bei 4 °C im Dunkeln aufbewahrt, um das Wachstum opportunistischer Mikroorganismen zu unterdrücken und den lichtinduzierten Abbau von Medienbestandteilen zu verhindern. Vor der Beimpfung mit Kulturen sollten Nährmedien auf eine für das Zellwachstum geeignete Temperatur erwärmt werden.
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