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Préparation des milieux

Préparation des milieux de culture

La préparation des milieux de culture cellulaire a des répercussions majeures sur la croissance des cellules de mammifère et sur les résultats expérimentaux. De même, il existe des milieux spécifiques, formulés pour favoriser la culture de micro-organismes in vitro. Les milieux de culture fournissent une source d'énergie pour la croissance cellulaire et des composés qui régulent les processus cellulaires. Les cultures de cellules procaryotes et eucaryotes peuvent avoir des besoins spécifiques pour leur croissance. La sélection des milieux de culture dépend du type de culture, de l'objectif de la mise en culture et des exigences en matière de densité cellulaire.

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Protocoles apparentés

Préparation des milieux

Les milieux de culture disponibles dans le commerce sont fournis sous forme déshydratée ou de poudre, de concentrat liquide ou en tant que solutions prêtes à l'emploi. Les milieux déshydratés pour les cultures de bouillon doivent être préparés en les dissolvant dans de l'eau distillée et en ajustant le pH final avant stérilisation. Les milieux en poudre pour les cultures sur gélose doivent être dissous dans de l'eau distillée, mélangés, puis bouillis ou autoclavés avant d'être versés dans des boîtes de Pétri stériles en employant des techniques aseptiques. Les milieux de culture fournis sous forme de concentrats liquides doivent être dilués de façon aseptique dans de l'eau distillée, leur pH doit être ajusté, puis ils doivent être répartis dans des récipients stériles pour le stockage. Les milieux de culture fournis en tant que solutions de travail sont prêts à l'emploi après ajout du sérum ou de tout autre supplément requis dans le cadre d'une filtration stérilisante et/ou de conditions aseptiques et après chauffage à la température appropriée pour la croissance cellulaire.

Stérilisation des milieux de culture

Les milieux de culture préparés à partir de poudres doivent être stérilisés par filtration, chauffés ou autoclavés avant utilisation. Bien que les milieux liquides soient souvent fournis stériles et à une concentration prête à l'emploi, une filtration stérilisante est recommandée, particulièrement si des sérums ou d'autres suppléments doivent être ajoutés avant utilisation. Après stérilisation, il convient d'employer des techniques aseptiques lors de la manipulation de ces milieux de culture pour prévenir toute contamination croisée ou croissance de micro-organismes indésirables.

Suppléments pour milieux de culture

Certains suppléments requis pour la culture ou la régulation cellulaire sont instables ou sensibles à la chaleur ; par conséquent, ils doivent être ajoutés par l'utilisateur au milieu de culture basal stérilisé à la chaleur avant utilisation. Le sérum, typiquement dérivé de sources bovines (FBS), est un supplément communément utilisé dans les milieux de culture de cellules animales. Des hormones, des facteurs de croissance et des molécules de signalisation spécifiques peuvent être requis pour faire croître certains types de cellules. Des suppléments, tels que l'IPTG, sont utilisés pour induire une expression protéique. Des antibiotiques peuvent également être ajoutés aux milieux de culture pour contrôler la croissance de contaminants fongiques et bactériens, bien que la contamination puisse être bien contrôlée avec une manipulation et un stockage appropriés des milieux.

Stockage et utilisation des milieux de culture

Les milieux de culture préparés et disponibles dans le commerce sous une forme liquide, de gélose pré-coulée ou de solutions prêtes à l'emploi sont typiquement stockés à 4 °C, dans l'obscurité, pour supprimer la croissance des micro-organismes opportunistes et éviter toute dégradation des composants des milieux de culture induite par la lumière. Avant inoculation des cultures, les milieux doivent être chauffés à la température appropriée pour la croissance cellulaire.

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Catégories de produits apparentées
Milieux et tampons classiques
Les formulations des milieux de culture cellulaire ont été optimisées durant des dizaines d'années de recherche pour répondre à diverses physiologies cellulaires. Vous trouverez ici des milieux du type DMEM, MEM, RPMI-1640, formulations F-10 et F-12 de Ham, ainsi que des solutions sans sérum telles que M199.
Milieux de culture végétale
Les milieux de culture végétale tels que le milieu de Murashige et Skoog (milieu MS), le milieu B5 de Gamborg et le milieu pour orchidées Phytamax™ contiennent des micronutriments, des macronutrients, des composés organiques, des vitamines et des régulateurs de croissance végétale essentiels pour la culture végétale de cellules, d'organes et de tissus.
Réactifs de culture végétale
Réactifs de culture de tissus végétaux, comprenant des agents gélifiants, des régulateurs de croissance végétale, des auxines, des cytokinines et autres suppléments facilitant la croissance et le développement des cellules et tissus végétaux en culture.
Albumines et protéines de transport
L'albumine est utilisée in vitro pour fixer, séquestrer et stabiliser un certain nombre de protéines et de petites molécules. Nous proposons des sérum albumines humaines et bovins ainsi que des réactifs pour protéines de transport pour diverses applications, notamment la culture cellulaire, la quantification des protéines et les études en lien avec les anticorps.
Hormones
Certaines hormones ont un effet de stimulation de la croissance sur les cellules. Les suppléments hormonaux indispensables de qualité "culture cellulaire" incluent la dexaméthasone, l'érythropoïétine, le β-œstradiol, le glucagon, l'hydrocortisone, l'insuline, la progestérone, et les prostaglandine E1 et E2.
Suppléments pour la culture cellulaire
Les suppléments pour culture cellulaire permettent de personnaliser les milieux avec des caractéristiques définies afin d'accompagner certaines applications particulières et de répondre aux besoins de la culture sans sérum. Nos suppléments de qualité "culture cellulaire" englobent des formulations d'ITS, des acides aminés, des vitamines, des antibiotiques et des réactifs qualifiés pour la culture de cellules d'hybridomes et d'insectes.
Sérums
Nos sérums pour culture cellulaire d'origine certifiée et de qualité contrôlée comprennent du FBS, d'autres sérums bovins, du sérum humain et des sérums de diverses espèces animales, ayant fait l'objet d'un dépistage rigoureux pour confirmer l'absence de contaminants, et dont les performances ont été testées en culture.
Sérum humain
Le sérum humain permet de cultiver des cellules humaines. Il est disponible sous forme de sérum humain AB dérivé du plasma, de sérum humain AB issu de sang total coagulé, de préparations inactivées par la chaleur et de préparations appauvries en complément.
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